分析粗多糖含量测定中选择葡聚糖标准品的原因

苯酚-硫酸法是用得较多的方法，苯酚-硫酸试剂可与游离的寡糖、多糖中的己糖、糖醛酸起显色反应，己糖在490 nm处有zui大吸收值，吸收值与糖含量呈线性关系。此法是先用标准糖制作标准曲线后，再通过多糖的显色反应测定吸光度，然后根据其在曲线上的位置推算出多糖的浓度从而推算其含量。此法操作简单、快速、灵敏、重复性好，对每种糖仅需制作一条标准曲线。蒽酮-硫酸法是另一种常用的方法，其原理是利用糖类遇浓硫酸脱水后生成糖醛或其衍生物，可与蒽酮试剂缩合，反应后溶液呈蓝绿色，于620 nm处有zui大吸收，显色深度与多糖的含量呈线性关系。

目前，在制作标准曲线的标准品的选用上普遍存在争议。葡萄糖因为其低廉的价格和方便的来源，一直是研究人员的。但当我们深究比色法的原理，发现其本身不能区分单糖和寡糖，所以它的测定结果很大程度上依赖于标准品的选择。此外，比色法通常用浓硫酸短时间水解粗多糖，对于分子量较小的粗多糖，高浓度的硫酸可以在较短时间内将其水解成寡糖和单糖，但当粗多糖的分子量较大时，水解是很难控制的。比如对香菇粗多糖（分子量500,000——1,000,000）的*水解就需要4M HCl或2M H2SO4于100℃作用3-6小时。因此如果用葡萄糖做标准曲线，势必对粗多糖样品中大分子部分的测量带来很大的误差。对于比色法测定当标准品与被测样品的结构类似时，得到的结果要准确得多，用葡萄糖做标准品和用葡聚糖做标准品测粗多糖含量时，前者测的结果不同程度的偏高。这样看来，用葡萄糖作为测定多糖含量的标准品是不合适的。

认识到这一事实，人们开始逐渐改用葡聚糖标准品作为测定粗多糖含量的标准品，使用的是分子量为500,000的葡聚糖。