动物性食品中氮哌酮及代谢物残留量测定的前处理方法

氮哌酮的危害及检测目的

氮哌酮是一种丁酰苯类神经安定药，动物使用后可消除紧张感，使其活动力下降，对环境淡漠并长期处于安静状态。有助于降低因应激及创伤引起的死亡率，因此在长途运输中常常给猪等动物使用该药。氮哌醇是氮哌酮在动物体内的代谢产物，与原药氮哌酮的化学结构相近，是氮哌酮的残留标示物。通过食物链氮哌酮及其代谢产物氮哌醇会对人体产生直接的危害。为此我国农业农村部和国家市场监督管理总局2019年发布的GB 31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药最大残留*》中明确规定了氮哌酮及其残留标示物氮哌醇在猪靶组织中的残留*。

本文阐述了如何将氮哌酮及其代谢物从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成高效液相色谱可以检测的形式。以提取、净化为重点，依据国标GB 29709-2013，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目：氮哌酮、氮哌醇

应用范围：猪的肌肉、皮+脂、肝脏和肾脏

高效液相色谱法

方法原理：试样中残留的氮哌酮和氮哌醇用乙腈萃取，正己烷除脂，MCX柱净化，高效液相色谱测定，外标法定量。

前处理仪器：

分析天平（感量0.01 g 和0.00001 g）；冷冻高速离心机；氮吹仪；旋涡混合器；固相萃取装置；超声波清洗机；均质机；离心管；滤膜（0.2 μm）。

检测仪器：HPLC +PDA

样品的制备与保存

取新鲜或冷冻空白组织、供试组织，去除筋膜，绞碎，并使均质。

取均质后的供试样品，作为供试试料。

取均质后的空白样品，作为空白试料。

取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。

试料于零下20 ℃ 以下保存。

前处理方法

1.提取

称取试样5 g±0.05 g，于离心管中，加乙腈10 mL，旋涡混合1 min，超声2 min，5000 r/min离心5 min，取上清液，残渣中加乙腈10 mL重复提取一次，合并两次上清液。于40 ℃水浴旋转蒸干。用2 %甲酸水溶液5 mL溶解残余物，加正己烷4 mL，混匀，5000 r/min离心5 min，弃正己烷层液，备用。

2.净化

MCX柱依次用甲醇3 mL、水3 mL和2 %甲酸水溶液3 mL活化，取备用液过柱，控制流速小于1 mL/min，用2 %甲酸水3 mL和甲醇3 mL淋洗，抽干，用5 %氨化甲醇4 mL洗脱。收集洗脱液，于40 ℃氮气吹干，用流动相（乙腈-乙酸铵溶液1+1）1.0 mL溶解残余物，旋涡混匀，供高效液相色谱法测定。

国标解读及注意事项

1.氮哌酮和氮哌醇标准物质用甲醇配成1 mg/mL的标准储备液，在零下20 ℃ 以下避光保存，有效期3 个月。

2.本方法使用乙腈两次提取目标化合物，正己烷除脂，阳离子交换柱富集净化，相当于5 g试料进行上机检测。

3.MCX柱净化方法为“酸上样，碱洗脱”。

4.氨水甲醇溶液现用现配，避免氨水挥发，影响洗脱效果；洗脱过程中洗脱溶剂少量多次加入，可以增加洗脱率。

5.固相萃取过程中需要控制流速，使溶液一滴一滴地流下，以保证离子交换的效果。

参考文献

GB 29709-2013 食品安全国家标准 动物性食品中氮哌酮及代谢物多残留的测定 高效液相色谱法

图1 猪组织中氮哌酮和氮哌醇残留量测定的前处理流程图

文章来源 坛墨质检